小鼠 CCL8/MCP-2 ELISA 检测试剂盒

核心提示:小鼠 CCL8/MCP-2 ELISA 检测试剂盒(日本IBL 进口原装货号:27773
规格:96T)

核心提示:人α–klotho ELISA
Kit(人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒)日本IBL原装进口,货号:27998日本IBL中国独家代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

核心提示:大鼠GRO/CINC-1 ELISA检测试剂盒日本IBL进口原装 货号:27162
规格:96T日本IBL中国独家代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

小鼠 CCL8/MCP-2 ELISA 检测试剂盒(日本IBL
进口原装货号:27773 规格:96T)

人α–klotho ELISA Kit(人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒)

大鼠GRO/CINC-1ELISA检测试剂盒日本IBL进口原装 货号:27162
规格:96T日本IBL中国独家代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

简介趋化因子配体8/单核细胞趋化因子2由97个氨基酸组成,属于C-C亚族.CCL8/MCP-2由单核细胞,纤维母细胞和上皮细胞产生,对CD4+
T细胞,CD8+
T细胞和NK细胞具有趋化活性.尽管CCL8/MCP-2在小鼠体内的生物活性仍存在未知之数,但近期有报告表明,血浆中CCL8/MCP-2浓度上升与移植物抗宿主病的发病有密切联系,这种病症是一种骨髓移植并发症,并且研究表明CCL8/MCP-2与小鼠机体内的免疫反应息息相关.实验原理此试剂盒是一种夹心法的酶联免疫吸附测定试剂盒,使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂,最终溶液所显示的颜色强度与小鼠样品中CCL8/MCP-2的量成正比检测范围78.13
~5,000
pg/mL预期用途仅用于研究,不可用于诊断此试剂盒可用于小鼠血清,EDTA血浆和肝素血浆中CCL8/MCP-的定量检测试剂盒成分

日本IBL原装进口,货号:27998日本IBL中国独家代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

人α–klotho ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒 前言简介
α–klotho是经基因改造小鼠体内的一种负调节基因,其基因序列存在多个种属,包括基于小鼠研究的人类,α–klotho蛋白是一种分子量约为130kDa的横跨膜蛋白,在肾脏和甲状旁腺内表达.近年来,已证实α–klotho是机体调节矿物质代谢的重要因子,如钙和磷的代谢.因此认为,小鼠幼龄老化症状就是因为α–klotho的缺失导致矿物质稳态破坏而引起的.
同时,据报道,构成α–klotho蛋白序列主要部分的长N-端胞外域可经分离释放至血液.然而对于可溶性α–klotho蛋白发挥的功能和变化仍存很多疑点,所以急需研制一套α–klotho检测系统此ELISA试剂盒可用于检测人血液的α–klotho蛋白人α–klotho
ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒
实验原理
此固相ELISA试剂盒基于夹心法原理,利用两种不同的高特异性抗体,TMB作为底物显示剂,显色强度与人可溶性α–klotho的量成正比人α–klotho
ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒
检测范围
93.75~6000pg/mL人α–klotho ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒
预期用途
此试剂盒可用于血清,血浆和尿液中人可溶性α–klotho的定量检测人α–klotho
ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒
试剂盒组成

  1. 包被板: 包被有抗人可溶性α–klotho小鼠IgG单抗,亲和纯化 96T x 1
  2. 浓缩标记抗体

: HRP标记的抗人可溶性α–klotho小鼠IgG Fab’亲和纯化 0.4ml x1

  1. 标准品: 重组人可溶性α–klotho 0.5mlx2
  2. EIA缓冲液: 30mlx1
  3. 标记抗体稀释液: 1%BSA,含0.05%吐温20的PBS 12mlx1
  4. 显色剂:TMB底物液 15mlx1
  5. 终止液: 1N硫酸 12mlx1
  6. 浓缩洗涤缓冲液: 含0.05%吐温20的磷酸缓冲液 50mlx1

人α–klotho ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒 实验所需材料
酶标仪 微量移液管和加样枪头量筒和烧杯 去离子水吸水纸 坐标纸标准品稀释管
洗瓶一次性试管人α–klotho ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒
试剂准备

  1. 洗涤缓冲液的准备:

先将洗涤浓缩液平衡至室温,充分混匀,取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀,即得.
稀释洗涤液应保存于冰箱内,2周内用完

  1. 酶标记抗体的准备:

用标记抗体稀释液将标记抗体稀释至30倍,即得例:如果只测一条板,8孔,则需要标记抗体800ul(30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液,混匀,使用时每孔各加100ul)此步骤应在标记抗体使用前完成剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内,于4℃保存

  1. 标准品的准备:

吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内,充分混匀,得到12000pg/ml的人可溶性α–klotho标准品

  1. 标准品的稀释:

准备8个试管用于标准品的稀释,各加230ul的EIA缓冲液,
配制成以下8管浓度1号管 6000pg/ml2号管 3000pg/ml3号管 1500pg/ml4号管
750pg/ml5号管 375pg/ml6号管 187.5pg/ml7号管 93.75pg/ml8号管
0pg/ml吸取230ul的标准品于1号管混匀,然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀,如下图所示,按此规律稀释,标准品范围为6000~93.75pg/ml.
8号管作为样品空白,浓度为0pg/ml.

  1. 样品稀释:

根据要求,用EIA缓冲液稀释样品.血清,血浆或尿液样品建议稀释2~4倍人α–klotho
ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒
实验步骤
使用前,将所有试剂应平衡至室温,大约30min,充分混匀,确保试剂质量无变化,标准曲线和样品检测同时进行.

试剂

检测样品

标准品

样品空白

试剂空白

检测样品100ul

稀释标准品100ul

EIA缓冲液100ul

EIA缓冲液100ul

盖板,于室温下温育60min

洗板7次

酶标抗体

100ul

100ul

100ul

盖板,于室温下温育30min

洗板9次

显色剂

100ul

100ul

100ul

100ul

室温避光温育30min

终止液

100ul

100ul

100ul

100ul

加终止液,30min内于450nm处读取OD值

  • 设试剂空白对照,并于相应的微孔中加入100ul EIA缓冲液
  • 确定好样品空白对照孔,检测样品孔和标准品孔,分别将100ul样品对照品、检测样品和稀释好的标准品加入到相应的微孔中。
  • 盖板,室温下温育60min
  • 用洗涤瓶洗板,在微孔中加入洗涤液浸泡15-30秒,弃去洗涤液。重复7次,最后在吸水纸上拍干.

如用洗板机洗板4次,需再用洗瓶洗板3次

  • 除试剂空白对照孔外,每孔各加100ul酶标抗体
  • 盖板,室温下温育30min
  • 按照上述步骤4)洗板9次
  • 用一次性试管取所需量的显色剂,各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染,勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中
  • 室温避光温育30min,加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色
  • 每孔各加100ul终止液,溶液颜色会变成黄色
  • 擦去微孔板底部的污迹或水滴,确保微孔内溶液无气泡.加入终止液后30min内于酶标仪
    450nm处读数

特别注意

  1. 试验样品采集后应立即检测或冻存,避免反复冻融样品,检测前应在低温下先将其完全溶解混匀

尤其是尿液样品,温度和冻融对其比血浆或血清稳定性影响更大,所以样品采集后应立即冻存,避免重覆冻存

  1. 试验样品根据所需,用EIA缓冲液稀释
  2. 建议各试验样品和标准品做双份检测
  3. 试验样品应在中性PH范围,有机溶剂的污染可能会影响实验结果
  4. 只能用本试剂盒提供的洗涤液洗板,不充足的洗涤会导致试验失败
  5. 用吸水纸拍干微孔板,避免刮擦
  6. TMB底物液应贮存于黑暗处,因其对光敏感,且避免接触金属
  7. 加入终止液后,30min内必须读数

人α–klotho ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒 结果计算
绘制标准曲线前,所有的数据都应减去试验样品空白值.以标准品的浓度及相对应OD值,在坐标纸上绘制标准曲线,从标准曲线上可直接读取未知样品的浓度此标准曲线仅供示例演示,不能用于获取试验数据.每次检测都应建立其标准曲线.人α–klotho
ELISA Kit人可溶性α–klotho蛋白检测试剂盒

本译文仅供参考,详情请以原文为准。
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前言简介细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子1最初是通过白介素1β刺激大鼠肾上皮细胞纯化提取的.1989年时,富山医科药科大学的Watanabe团队鉴别出了大鼠CINC-1的氨基酸序列.CINC-1是CXC趋化因子亚族的一员.另外其它几种大鼠CXC趋化因子的序列也被鉴别出来,大约有63

  1. 包被板,包被了抗小鼠CCL8/MCP-2兔IgG 96孔
  2. 标记抗体,
  • 67%的氨基酸序列与CINC-1的相同.此外, GROα, GROβ与GROγ也分别有68%,
    71%,69%与CINC-1序列一致.这表明CINCs是人GROs的大鼠相似物.原理此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与样品中大鼠GRO/CINC-1的量成正比.检测范围4.69
    ~ 300
    pg/mL预期用途■此IBL试剂盒能用于大鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中GRO/CINC-1的定量检测■重组和天然的大鼠GRO/CINC-1都可以检测.试剂盒成分1
    预包被板: 抗大鼠GRO/CINC-1兔子IgG,亲合纯化 96T2 酶标记抗体:
    HRP标记抗大鼠GRO/CINC-1兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 13 标准品:
    重组大鼠GRO/CINC-1 0.5mL x 24 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL
    x 15 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 16 显色剂:
    TMB底物液 15mL x 17 终止液: 1N硫酸 12mL x 18 浓缩洗涤液: 含1% BSA,
    0.05%吐温20 BPS 50mL x 1操作说明1实验所需器材 酶标仪
    微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 蒸馏水 冰箱 坐标纸 吸水纸 试管 温育箱 洗瓶
    一次性试剂管2准备

30X浓缩,HRP标记抗小鼠CCL8/MCP-2兔IgG单抗,Fab’亲合纯化 0.4ml x 1

  1. 洗涤液的准备
  1. 标准品,重组小鼠CCL8/MCP-2 0.5mlx 2
  2. EIA缓冲液,1%的BSA,含0.05%的吐温20的PBS 30mlx 1
  3. 标记抗体稀释液,1%的BSA,含0.05%的吐温20的PBS 12mlx 1
  4. 显色剂,TMB, 15mlx 1
  5. 终止液,1N硫酸, 12mlx 1
  6. 洗涤缓冲浓缩液,40X浓缩,0.005%吐温20的磷酸缓冲液 50mlx 1

试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL蒸馏水稀释50
mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周.

实验所需材料但试剂盒未提供酶标仪 移液器和枪头带刻度的量筒和烧杯
去离子水冰箱 坐标纸吸水纸 标准品稀释试管保温箱(37±1℃)
洗瓶一次性试管试剂准备

  1. 酶标记抗体的准备
  1. 洗涤缓冲液制备:试剂盒的洗涤液为40倍浓缩,使用前,先将洗涤浓缩液平衡至室温,充分混匀,然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀,即得。配制的稀释洗涤液应保存于冰箱内,并于2周内用完
  2. 稀释标记抗体的制备:用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍,即得。

试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍.示例:如果你用一条板,就需800
μL.的标记抗体.就用870 μL的标记抗体稀释液稀释30
μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C

例:如果只测一条板,8孔,则需要标记抗体800ul(30ul的浓缩标记抗体+870ul的标记抗体稀释液,混匀,使用时每孔加100ul)此步骤在实验开始前完成剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内,保存在4℃

  1. 标准品的准备
  1. 标准品的制备:吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内,充分混匀,得到浓度为10,000
    pg/mL的小鼠CCL8/MCP-2标准品
  2. 标准品的稀释:准备8个试管用于标准品的稀释,每管加入230ul的EIA缓冲液

加0.5 mL的蒸馏水到瓶装标准品,制成浓度为600 pg/mL大鼠GRO/CINC-1标准品液

每管的浓度如下1号管 5,000 pg/mL2号管 2,500 pg/mL3号管 1,250 pg/mL4号管
625 pg/mL5号管 312.5 pg/mL6号管 156.25 pg/mL7号管 78.13 pg/mL8号管
0ng/ml吸取230ul的浓度为10,000
pg/mL的标准品至1号管混匀,然后从1号管吸取230ul加入2号管,依次连续稀释,标准品范围为78.13-5,000
pg/mL .8号管为浓度为0
pg/mL图片 1

  1. 标准品的稀释

试剂

准备8支试管,并每支各加230 μL
EIA缓冲液
.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:试管1 300 pg/mL试管2 150
pg/mL试管3 75 pg/ mL试管4 37.5 pg/mL试管5 18.75 pg/mL试管6 9.38
pg/mL试管7 4.69pg/mL试管8 0
pg/mL吸取230ul的标准品液于1号管混匀,然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀,如下图所示,按此规律稀释,第8号管为0
pg/mL作为样品空白对照图片 2

样品

试剂

标准品

待检测样品

样品空白

标准品

试剂空白

样品空白

检测样品100ul

试剂空白

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